¿Qué es la fase normal y la fase inversa?

Fase Normal vs. Fase Inversa en Cromatografía: Una Distinción Crucial

La cromatografía, una técnica analítica fundamental en química y bioquímica, se basa en la separación de componentes de una mezcla mediante su diferente interacción con dos fases: una fase estacionaria y una fase móvil. Dentro de este marco, la distinción entre la fase normal y la fase inversa es crucial para la elección del método adecuado y la obtención de resultados óptimos. Esta diferencia radica esencialmente en la polaridad relativa de las fases estacionaria y móvil.

En la cromatografía en fase normal (CN), la fase estacionaria es polar, mientras que la fase móvil es apolar o relativamente menos polar. Imagine un escenario donde la fase estacionaria es similar a una superficie pegajosa con una alta afinidad por moléculas polares. Los compuestos polares de la mezcla interactuarán fuertemente con esta fase estacionaria, permaneciendo retenidos durante más tiempo. Por el contrario, los compuestos apolares, que no tienen afinidad por la superficie polar, viajarán rápidamente con la fase móvil, eluendo primero. En esencia, la fase normal se basa en la afinidad de los analitos por la fase estacionaria polar. Ejemplos de fases estacionarias polares incluyen sílice (SiO₂) y alúmina (Al₂O₃).

En contraposición, la cromatografía en fase inversa (CI) invierte esta relación de polaridades. Aquí, la fase estacionaria es apolar, generalmente una cadena hidrocarbonada unida a un soporte sólido como la sílice, mientras que la fase móvil es polar, como una mezcla de agua y metanol. En este caso, son los compuestos apolares los que presentan una mayor afinidad por la fase estacionaria apolar, quedando retenidos por más tiempo. Los compuestos polares, por su parte, interaccionan débilmente con la fase estacionaria apolar y son eluidos primero. La CI se basa, por tanto, en la repulsión de los analitos polares por la fase estacionaria apolar.

La popularidad de la fase inversa se debe a varias ventajas:

• Mayor Versatilidad: La CI es adaptable a una amplia gama de compuestos, incluyendo moléculas polares e iónicas, que son difíciles de analizar con la fase normal. La posibilidad de modificar la composición de la fase móvil (por ejemplo, variando la proporción de agua y metanol) permite un control preciso de la separación.
• Mejor Reproducibilidad: Las fases estacionarias apolares son más robustas y menos susceptibles a la degradación o desactivación que las fases polares, lo que conlleva una mayor reproducibilidad de los resultados.
• Mayor Eficiencia: En muchos casos, la CI proporciona una mejor eficiencia de separación y picos más definidos.

Aunque la fase normal tiene sus aplicaciones específicas, sobre todo en la separación de compuestos con una gran diferencia de polaridad, la fase inversa se ha convertido en el método cromatográfico más utilizado debido a su flexibilidad, robustez y versatilidad en el análisis de una amplia variedad de compuestos en diferentes campos de la ciencia. La elección entre fase normal y fase inversa dependerá, en última instancia, de la naturaleza de los analitos a separar y los objetivos del análisis.